РЕКОМБИНАЦИЯ У E. COLI: ГЕНЕТИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ И МОЛЕКУЛЯРНЫЙ МЕХАНИЗМ. Клетки E. coli способны к обмену генетической информацией с помощью двух процессов, заменяющих им половой: конъюгации и трансдукции. При конъюгации клетки разных половых типов вступают в контакт, и из клетки донора в клетку реципиента передается одна из двух цепей кольцевой ДНК. Реципиентные клетки никогда не получают от донора полную кольцевую ДНК, а только ее часть, которая достраивается до линейного двуцепочечного фрагмента. При трансдукции из клеток донора в клетку реципиента с помощью бактериофага переносится двуцепочечный фрагмент бактериальной хромосомы. Далее донорный фрагмент должен заменить гомологичную часть хромосомы реципиента с помощью парных кроссинговеров. Механизм кроссинговера у E. coli. Самый главный белок RecA - продукт гена recA. Этот белок участвует в рекомбинации и в репарации (процесс восстановления природной структуры ДНК, поврежденной при нормальном биосинтезе ДНК в клетке или в результате воздействия физическими или химическими агентами). Основное назначение белка RecA - приводить во взаимодействие одноцепочечную ДНК со сходным дуплексом. У белка есть два сайта связывания с ДНК. Первый используется для первичного связывания с ДНК. Молекулы белка собираются на ДНК по принципу "конец-в-конец", образуя вокруг ДНК правозакрученную белковую спираль. В результате возникает образование - RecA-ДНК-филамент. В филаменте двуцепочечная ДНК изменяет свою конформацию. Она оказывается растянутой в 1,5 раза. Это необходимо для последующего взаимодействия дуплекса с гомологичной одноцепочечной ДНК. Формирование филамента завершает подготовительную стадию кроссинговера. Реакции, составляющие следующую, синаптическую стадию кроссинговера, происходят внутри филаментов. Филаменты могут вступать в рекомбинацию только со свободной, не находящейся в филаменте ДНК. Взаимодействие филамента с голой ДНК осуществляется за счет второго сайта связывания RecA (слабое связывание). Нахождение гомологии связано с формированием гетеродуплекса. Оно начинается с образования структуры, в которой задействованы три цепи ДНК: одноцепочечная ДНК внедряется в дуплекс и образует двойную спираль (гетеродуплекс) с одной, комплементарной ей цепью дуплекса, вытесняя вторую цепь. На следующем этапе - постсинапсисе гетеродуплекс удлиняется путем миграции ветвления. В случае рекомбинации между одноцепочечной ДНК и дуплексом она происходит в определенном направлении. Основной путь рекомбинации у E. coli - RecBCD. Главную роль здесь играет фермент RecBCD-нуклеаза, субъединицы которой кодируются генами recB, recC и recD. RecBCD может гидролизовать одно - и двуцепочечную ДНК. Он может расплетать дуплекс ДНК и расщеплять одноцепочечную ДНК. RecBCD-нуклеаза готовит субстрат для белка RecA.
Author Archive > admin
20. Конверсия и синапсис гомологичных хромосом
КОНВЕРСИЯ (от лат. conversio — изменение, превращение), способ словообразования без использования специальных словообразовательных аффиксов, при котором переход слова (основы) из одной части речи в другую происходит без его изменения. В мейозе конверсия и кроссинговер являются раздельными процессами, разобщенными во времени и играющими разные роли. Функционирование аппаратов конверсии и кроссинговера связано с особыми уплотнениями в местах контактов ДНК и синаптонемного комплекса, называемыми рекомбинационными узелками. Они бывают двух типов: ранние и поздние. Первые связаны с конверсией, вторые (их меньше) - с кроссинговером. Роль конверсии заключается в проверке гомологии между хромосомами после их временного синапсиса. Проверка осуществляется сравнением последовательностей ДНК через попытку сформировать гетеродуплекс. При наличии гомологии ситуация уравновешивается при участии синаптонемного комплекса. При отсутствии гомологии хромосомы расходятся для новых попыток поиска гомологии. Синапсис - прямое следствие поиска гомологии.
21. Модели и механизмы репликации
РЕПЛИКАЦИЯ - удвоение молекул ДНК (у некоторых вирусов РНК) при участии специальных ферментов. Репликацией называется удвоение хромосом, в основе которого лежит репликация ДНК. Репликация обеспечивает точное копирование генетической информации, заключенной в молекулах ДНК, и передачу ее от поколения к поколению. Принципы репликации: Инициация цепей ДНК. ДНК-полимеразы способны добавлять новые дезоксирибонуклеотидные звенья к 3'-концу уже имеющейся полинуклеотидной цепи. Заранее образованную цепь, к которой добавляются нуклеотиды - затравка. РНК-затравку синтезирует фермент ДНК-праймаза. Затравка отличается от остальной новосинтезированной цепи ДНК, т. к. состоит из рибонуклеотидов, и далее может быть удалена. Образовавшиеся бреши застраиваются ДНК-полимеразой. Расплетание двойной спирали ДНК. Область репликации, которая перемещается вдоль родительской спирали ДНК и характеризующуюся местным расхождением двух ее цепей была названа репликационной вилкой. В ней ДНК-полимеразы синтезируют дочерние молекулы ДНК. Область, которая уже реплицирована, имеет вид глазка внутри нереплицировавшейся ДНК. Глазок образуется в местах молекулы, где находятся специфические нуклеотидные последовательности - точки начала репликации. В зависимости от направления репликации глазок содержит 1или 2 репликационные вилки. Ферменты ДНК-хеликазы быстро движутся по одиночной цепи и, встречая на пути участок двойной спирали, они разрывают водородные связи между основаниями, разделяют цепи и продвигают репликационную вилку. Белки ДНК-топоизомеразы вносят в цепь ДНК цепочечные разрывы, позволяющие цепям ДНК разделиться, а затем заделывают эти разрывы. Топоизомеразы участвуют в расцеплении зацепленных двухцепочечных колец, образующихся при репликации кольцевых ДНК. Прерывистый синтез ДНК. Дочерние цепи растут в направлении 5'-3' (удлиняется 3'-конец затравки), а матрица считывается ДНК-полимеразой в направлении 3'-5'. Синтез ДНК происходит на одной из матричной цепей. На второй ДНК синтезируется короткими фрагментами (фрагменты Оказаки). Вновь образованная цепь, которая синтезируется непрерывно, называется ведущей, а другая, собираемая из фрагментов Оказаки, отстающей. Синтез каждого из этих фрагментов начинается с РНК-затравки. Через некоторое время РНК-затравки удаляются, бреши застраиваются ДНК-полимеразой и фрагменты сшиваются в одну непрерывную цепь ДНК специальным ферментом.
Молекула ДНК-праймазы с ДНК-хеликазой образуют структуру - праймосому. Она движется в направлении раскрывания репликационной вилки и по ходу движения синтезирует РНК-затравку для фрагментов Оказаки. В репликационной вилке одновременно работают около двадцати разных белков. Процесс репликации хромосомы бактерий начинается в области ДНК (точке Ori) и продолжается до тех пор, пока не удвоится вся ДНК хромосомы. Бактериальная хромосома представляет собой единицу репликации - репликон. Итоги: В процессе репликации участвуют: 1. ДНК-хеликаза, которая расплетает двойную спираль и формирует репликационную вилку. 2. ДНК-полимеразы катализируют синтез полинуклеотидной цепи ДНК в направлении 3'-5. В направлении 5'-3' непрерывно синтезируется одна цепь - ведущая; другая цепь, отстающая, синтезируется в виде коротких фрагментов Оказаки. 3. ДНК-праймаза катализирует короткие молекулы РНК-затравки. Впоследствии фрагменты РНК удаляются - их заменяет ДНК. 4. ДНК-топоизомеразы помогают решить проблемы кручения и спутывания спирали ДНК. 5. Инициаторные белки связываются в точке начала репликации и способствуют образованию нового репликационного глазка с одной или двумя вилками.
22. Сигнализация с участием внутриклеточных рецепторов: механизмы действия стероидных гормонов
По химическому строению все гормоны можно разделить на две группы. Одну группу составляют стероидные гормоны, другую - амины и пептидные гормоны (инсулин, тиреотропный гормон, лютеинизирующий гормон). К стероидным гормонам относятся Прогестерон, кортизол, гидрокортизон и эстрадиол. Эти гормоны вызывают много разнообразных длительных эффекторов. Тироксин и трииодтиронин по химическому строению не имеют ничего общего со стероидами, но сходны с ними по механизму действия на клеточном уровне и могут быть отнесены к этой группе. Действие гормонов основано на стимуляции или угнетении каталитической функции некоторых ферментов в клетках органов - мишеней. Это действие может достигаться путем активации или ингибирования ферментов. Важная роль в этом принадлежит циклическому ЦАМФ; который является здесь вторым посредником (роль первого посредника выполняет сам гормон). Механизм действия гормонов пептидной и стероидной природы различен. (Амины и пептидные гормоны не проникают внутрь клетки, а присоединяются на ее поверхности к специфическим рецепторам в клеточной мембране. Рецептор связан с ферментом Аденилатциклазой. Комплекс гормона, с рецептором активирует аденидатцикладу, которая расщепляет АТФ с образованием цАМФ. Действие цАМФ реализуется через цепь реакций, ведущую к активации ферментов путем их фосфорилирования, которые осуществляют конечный эффект гормона). Стероидные гормоны проникают через клеточную мембрану. Гормон связывается с рецептором в цитоплазме. Образовавшийся гормон - рецепторный комплекс транспортируется в ядро клетки, где вступает в обратимое взаимодействие с ДНК и индуцирует синтез белков. Путем включения специфических генов на определенном участке ДНК одной из хромосом синтезируется мРНК, которая переходит из ядра в цитоплазму, присоединяется к рибосомам и индуцирует здесь синтез белка. Стероидные гормоны вызывают синтез новых ферментных молекул. Эффекты стероидных гормонов проявляются медленнее, чем действие петидных гормонов, но длятся дольше.
23. Молекулярные основы возникновения и распространения потенциала действия
Функция аксона заключается В проведении нервных импульсов. Потенциал действия возникает в результате кратковременной реверсии мембранного потенциала, волнообразно распространяющегося вдоль аксолеммы. Потенциал действия зарождается в начальном, ближайшем к телу клетки сегменте аксона и пробегает по аксону к его окончаниям. Потенциал действия состоит из двух фаз. Фаза деполяризации соответствует быстрому изменению мембранного потенциала (деполяризация мембраны) на 110мВ. Мембранный потенциал изменяется от уровня покоя (70мВ) до значения, близкого к ЕNa (40мВ). Во время фазы реполяризации мембранный потенциал вновь достигает уровня покоя, т. е. примерно -80 мВ. Фаза деполяризации потенциала действия обусловлена временным повышением проницаемости мембраны аксона для натрия. В этот момент открываются натриевые каналы, и Na устремляется в клетку. Этот поток положительных ионов приводит к деполяризации мембраны. Фаза реполяризации потенциала действия связана с закрытием натриевых каналов и открытием калиевых каналов. Вход натрия в аксон снижается из-за падения натриевой проницаемости: повышение калиевой проницаемости приводит к увеличению выхода К+. Так как по мере выхода К удаляются положительные заряды, мембрана реполяризуются. Закрытие калиевых каналов приводит к восстановлению исходного уровня мембранного потенциала, значения проницаемости для калия и натрия также при этом возвращаются в прежнее. Возникновение нервного импульса. Все возбудимые клетки характеризуются пороговым значением мембранного потенциала, при котором возникает потенциал действия. Когда в результате деполяризации мембраны он достигает этого значения, то генерируется нервный импульс. Пороговый уровень соответствует потенциалу, при котором входящий поток натрия равен выходящему потоку калия, это приводит к быстрой деполяризации мембраны нейрона, т. е. к возникновению потенциала действия. Потенциал действия возникает только в том случае, когда под действием раздражителя мембрана деполяризуется до порогового уровня. Генерация потенциала действия подчиняется закону "все или ничего": когда сила раздражителя достаточна для пороговой деполяризации мембраны нейрона, может возникнуть нервный импульс.